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        超濾離心管通常是不需要預處理即可使用的

        點擊次數:449次 發布時間:2020-12-15

          超濾離心管的使用方法:
          1).將超濾內管插入所提供的一個微量離心管中。
          2).向超濾管內管中加入不超過500μL的樣本,并蓋上蓋子。
          3).將蓋好蓋子的超濾管放入離心轉子中,讓蓋子的連接帶朝著轉子的中央;用一個類似的超濾管平衡。
          4).以14,000xg離心約10-30分鐘,具體時間取決于所使用超濾管的NMWL。
          5).離心結束后將整個超濾管從離心機中取出,取出內管。
          6).為了回收濃縮后的溶質,將內管倒過來插在-個干凈的微量離心管中。放在離心機中,讓打開的蓋子朝著轉子的中央;用一個類似的超濾管進行平衡。以1,000xg離心2分鐘,使濃縮后的樣本從超濾內管轉移到收集管中。超濾液可以保存在收集管中。
          超濾離心管是否要預處理:
          通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質樣本處理,特別是較稀的蛋白質溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附較小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結合的程度隨著個別蛋白結構的不同而不同。含有帶電的或者疏水結構域的蛋白質更易于不可逆結合到不同表面。表面做鈍化預處理可降低蛋白質在膜表面的吸附性損失,大多數情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。鈍化的方法是預先用較高容積的鈍化溶液預浸泡柱子1小時以上,蒸餾水徹底沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以徹底除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。
          超濾離心管的應用:
          蛋白質樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換;
          樣品中去垢劑的去除;雙向電泳樣品的制備;
          未結合標志物的去除;
          尿液的濃縮;
          核算樣品濃縮及脫鹽;
          法醫鑒定分析樣品的預處理
          純化血清多肽做生物標志物;抗體的快速濃縮
          
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